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慢病毒包裝簡要程序：以六孔板中的1孔為例，每個樣品需要1×10∧6個293FT細胞。1、取1.5ml滅菌EP管，加入1.5μg包裝混合質(zhì)粒和0.5μg表達質(zhì)粒以及250μl的無血清OptiMEM。輕柔混勻，室溫孵育5min。2、取1.5ml滅菌EP管，取9μl脂質(zhì)體2000l溶于250μl無血清Opti-MEMI培養(yǎng)基中。輕柔混勻，室溫孵育5min。3、將DNA溶液和脂質(zhì)體溶液輕柔混勻。室溫孵育20min4、用胰酶消化并記數(shù)293FT細胞。用含血清的DMEM培養(yǎng)基重懸細胞。5...

一、自噬誘導劑(1)BredeldinA/Thapsigargin/Tunicamycin：模擬內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激(2)Carbamazepine/L-690，330/LithiumChloride（氯化鋰）：IMPase抑制劑（即Inositolmonophosphatase，肌醇單磷酸酶）(3)Earle's平衡鹽溶液：制造饑餓(4)N-Acetyl-D-sphingosine（C2-ceramide）：ClassIPI3KPathway抑制劑(5)Rapamycin：mTOR抑...

巴氏芽孢桿菌在水產(chǎn)上也算是用得比較多了，能夠肥水、凈水、降解氨氮、亞鹽等有害物質(zhì)。這些芽孢的作用大家都清楚，水質(zhì)惡化、底質(zhì)惡化等都能使用芽孢來改善，可是你知道為什么這小小的細菌，卻有這么大的用途嗎？其實上面這些用途都是芽孢的一個能力引申出來的——分解。先說肥水，為什么芽孢能肥水？細菌也會在塘里生長，不會搶奪藻類的營養(yǎng)嗎？首先藻類是不能直接利用有機物的，像殘餌、糞便、尸體等都無法成為藻類生長的助力，而芽孢會將有機質(zhì)分解為無機物，這樣植物就能直接利用這些營養(yǎng)成分了，從而達到肥水的...

細胞培養(yǎng)中常見的污染情況總結(jié)如下:常見的污染如下：1、細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據(jù)感染細菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。仔細檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象！可在培養(yǎng)液中加相應的抗生素處理2、霉菌：培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質(zhì)，37度孵箱培養(yǎng)2-3天，仍清亮...

常見菌類污染情況圖片1.桿菌常見的有大腸桿菌，長度通常在2-5um左右。2.球菌常見的有葡萄球菌，直徑通常在1-2um左右。3.霉菌常見的有毛霉，菌絲寬2-10um左右，長度短則幾十um，長則可達幾mm。以上3種是細胞培養(yǎng)過程中常見的菌類污染，其共性是增殖快，適應能力強，很難*，一般如果確認培養(yǎng)細胞有以上污染，建議盡快丟棄，并檢查相關(guān)試劑和培養(yǎng)箱是否有污染，確認沒有后再重新復蘇。那么細胞如果還是不幸污染了，那又該怎么辦呢？我把細胞污染分為早期和晚期兩種。早期污染是細胞狀態(tài)變差...

ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點在上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。實驗顯示，ELISA試劑盒經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物...

無論新人還是熟手，細胞污染都是必須要面對的，那對于細胞污染，我覺得zui好的措施就是預防為主，因為細胞一旦污染，想救是非常困難的，即便救活，細胞狀態(tài)也會差很多。所以我先來說下我是怎么預防細胞污染的。生物安全柜是處理細胞的主要場所，也是細胞發(fā)生污染的主要場所，所以安全柜的正確使用是預防細胞污染的di一步。那么安全柜內(nèi)需要注意的小細節(jié)有哪些呢？首先，所有進入安全柜的東西在進入前都要用75%的酒精消毒。特別要注意的是我們的手，只要出了安全柜，再進入安全柜前都要噴75%的酒精消毒。實...

一、肉眼觀察以下幾項：1.細胞瓶身：如果瓶身上沒有裂縫，正常；如果瓶身上有裂縫，則污染幾率非常大。2.培養(yǎng)基顏色：如果培養(yǎng)基顏色是紅色或者粉色，正常；如果是橙色，則可能是污染或者細胞過密；如果是黃色，則污染幾率非常大。3.培養(yǎng)基澄清度：如果培養(yǎng)基澄清，正常；如果有少許漂浮物，則可能是污染或者有細胞凋亡；如果培養(yǎng)基很渾濁，甚至出現(xiàn)絮狀物，則污染幾率非常大。二、進行顯微鏡下觀察（通常觀察前需先靜置細胞1-2h）顯微鏡下可以清晰觀察到細胞是否有菌類污染，菌類污染通常分為桿菌、球菌和...